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流式細胞儀的調(diào)試和使用

   2019年06月26日 15:01  
  【儀器網(wǎng) 使用手冊】接下來小編為大家介紹下流式細胞儀的調(diào)試和使用
 
  簡介
 
  古語說:“工欲善其事,必先利其器”。要想很好地應(yīng)用流式細胞分析和分選技術(shù),必需先對儀器進行調(diào)試,使其處于良好的工作狀態(tài),并能正確使用儀器。下面簡要介紹細胞計的調(diào)試項目及要點、使用的程序等等。
 
  調(diào)試和校準
 
  流式細胞儀在使用前,甚至在使用過程中都要精心進行調(diào)試,以保證工作的可靠性和*性。調(diào)試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區(qū)的光路等。
 
  激光強度:除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長的激光出光外,還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為zui大。
 
  液流速度:可通過操作臺數(shù)字顯示監(jiān)督,調(diào)節(jié) 氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。
 
  測量區(qū)光路調(diào)節(jié)?。哼@是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測量區(qū)的液流、激光束、90散射測量光電系統(tǒng)垂直正交,而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。
 
  流式細胞術(shù)中所測得的量是相對值,因此需要在使用前或使用中對系統(tǒng)進行校準或標定,這樣才能通過相對測量獲得jue對的意義。因而FCM中的校準具有雙重功能:儀器的準直調(diào)整和定量標度。標準樣品應(yīng)該穩(wěn)定,有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形,樣品分散性能良好,且經(jīng)濟、容易獲得。常用標準熒光微球作為非生物學標準樣品,雞血紅細胞做為生物學標準樣品。微球用樹脂材料制作,或標有熒光素,或不標記熒光素。所用的雞血紅細胞標準樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4),經(jīng)PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細胞混合,室溫下振蕩醛化24h,zui后經(jīng)PBS再清洗,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經(jīng)熒光染色,所測光信號為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光。
 
  儀器的操作和使用
 
 ?、俅蜷_電源,對系統(tǒng)進行預(yù)熱;
 
 ?、诖蜷_氣體閾,調(diào)節(jié) 壓力,獲得適宜的液流速度;開啟光源冷卻系統(tǒng);
 
  ③在樣品管中加入去離子水,沖洗液流的噴嘴系統(tǒng);
 
 ?、芾眯蕵藴蕵悠罚{(diào)整儀器,使在激光功率、光電倍增管電壓、放大器電路增益調(diào)定的基礎(chǔ)上,0和90散射的熒光強度zui強,并要求變異系數(shù)為zui?。?br /> 
 ?、葸x定流速、測量細胞數(shù)、測量參數(shù)等,在同樣的工作條件下測量樣品和對照樣品;同時選擇計算機屏上數(shù)據(jù)的顯示方式,從而能直觀掌握測量進程;
 
 ?、迾悠窚y量完畢后,再用去離子水沖洗液流系統(tǒng);
 
 ?、咭驗閷嶒灁?shù)據(jù)已存入計算機硬盤(有的機器還備有光盤系統(tǒng),存貯量更大),因此可關(guān)閉氣體、測量裝置,而單獨使用計算機進行數(shù)據(jù)處理;
 
 ?、鄬⑺杞Y(jié)果打印出來。
 
  操作和使用中的注意事項
 
  1)光電倍增管要求穩(wěn)定的工作條件,暴露的較強的光線下以后,需要較長時間的“暗適應(yīng)”以消除或降低部分暗電流本底才能工作;另外還要注意磁屏蔽;
 
  2)光源不得在短時間內(nèi)(一般要1h左右)關(guān)上又打開;使用光源必須預(yù)熱并注意冷卻系統(tǒng)工作是否正常;
 
  3)液流系統(tǒng)必需隨時保持液流暢通,避免氣泡栓塞,所使用的鞘流液使用前要經(jīng)過過濾、消毒;
 
  4)注意根據(jù)測量對象的變換選用合適的濾片系統(tǒng)、放大器的類型等;
 
  5)特別強調(diào)每次測量都需要對照組。
 

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