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制備型液相色譜儀應如何選擇操作條件

2019年11月25日 11:15

　　【儀器網使用手冊】制備型液相色譜儀目的是對產品的單體進行提取和純化，與蒸餾、萃取等純化方法相比制備型液相色譜法更有效，但對操作的要求也更高。為保證制備型液相色譜儀可以達到理想的實驗效果，需要謹慎選擇操作條件，減少影響分離效果的因素。

　　色譜柱的選擇

　　色譜柱的容量有一定限制，每種色譜柱都有自己的負載能力，因此樣品的導入值上限需要根據所用的色譜柱確定。色譜柱與大樣品量的關系如下：

　　1.色譜柱內半徑越大，柱子的負載能力越高。

　　2.分配系數K增加，柱子的負載能力也會增加。同時，溶質的保留體積同樣也會增加。

　　3.色譜柱的填充方法影響著填充密度，用良好方法填充的柱子密度趨近它的大值，柱子的樣品量和分辨率同樣也會趨近大值。

　　4.采用表面積大的吸附劑雖然會減弱色譜系統(tǒng)的速度和適用范圍，但可以增加柱子的負載能力。

　　5.柱子的負載能力還隨著柱子的長度增加而增長，但柱子過長會損失柱效。

　　6.填料顆粒的大小與柱子負載量也呈正相關關系。

　　樣品的溶解

　　樣品在溶劑里的溶解度會影響注入的大樣品量。在流動相里難溶解的物質通常不能充分分離或分辨率比較低，因此需要先將樣品溶解在另一種溶劑中，再將這種溶液送人色譜分離系統(tǒng)。中間溶劑的選擇很重要，并且需要經驗。

　　流動相的純度

　　流動相的純度與樣品中的純度息息相關。在分離組分特性相近或痕量組分時，流動相里的雜質還可能污染色譜柱，影響分離效能。因此流動相須保證純凈。

　　流動相的流速

　　流動相的流速與分離速度、分離效率相關，流速越快分離速度越快，但分離效率越低，因此需要選擇合適的速度保證速度與效率并重。

　　固定相的選擇

　　為了分辨效果，應盡量選擇吸附色譜。從填料的容量看，全多孔型比表面多空型好；從固定相微粒的大小看，30~50μ較常用。

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