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胞培養(yǎng)實驗中*的除了培養(yǎng)基，*也是非常重要的一個角色，雖然細(xì)胞培養(yǎng)試驗基本技術(shù)大同小異，每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件各不相同，但是，在細(xì)胞傳代過程中都少不了這個步驟—*消化。
細(xì)胞消化使用*時需要了解哪些問題？
一、 細(xì)胞培養(yǎng)過程中為什么要使用*呢？*的作用是什么？
*是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。
圖1.*酶切位點
二、 使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，在使用*消化時發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過程，這是何原因？
血清終止的原理其實是競爭抑制，就是用過量的牛血清中含有的蛋白和*結(jié)合，使*失去消化細(xì)胞蛋白的機會。
三、 為什么使用了*消化，細(xì)胞還是成團的，這可能是什么原因?qū)е碌模?br />
?、?消化時間不夠 ② 吹打力度不夠 ③ *消化液濃度不夠 ④ 細(xì)胞密度過高之后才消化傳代 ⑤ *存儲不當(dāng)，或者使用了過期*
四、 *分裝凍存時要注意什么？
*分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時體積會膨脹，多次使用同一瓶*反復(fù)凍融會降低消化效果并增大污染的可能性。
五、 怎么才能判斷*消化*？
注意：不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。
一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動了，多半呈沙狀移動就可以了，就應(yīng)該停止消化。
六、 *適用于哪些細(xì)胞消化？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？
*適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對纖維性組織和較硬的癌組織效果較差。*的消化效果主要與pH值、溫度、*濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。
七、 *中的酚紅有哪些作用？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH指示劑，中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明：酚紅可以模擬固醇類激素(特別是雌激素)的作用。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞尤其是哺乳類細(xì)胞時，建議用不含酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，在做流式細(xì)胞檢測時，也會使用不含酚紅的培養(yǎng)基或者*。
圖 2. Phenol red test
八、 在做細(xì)胞凋亡檢測時，細(xì)胞為什么不能用含有EDTA的*消化？
Annexin V(膜聯(lián)蛋白)是Ca2+依賴的蛋白，EDTA會螯合Ca2+從而影響Annexin V，進而影響結(jié)果，因此需選用不含EDTA的*。建議放入培養(yǎng)箱中進行消化，時間可以長一點。隨時觀察細(xì)胞情況，避免消化過度；也可使用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下，后用槍吹勻，比消化簡單，還可避免使用*帶來的傷害。
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展會城市：石家莊市展會時間：2024-10-15