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實用小貼士之液相色譜柱如何使用?

來源:島津企業(yè)管理(中國)有限公司   2020年04月26日 14:02  

色譜柱是高效液相色譜儀的重要組成部分,在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用,是色譜分析的核心部件,對高效液相色譜柱的正確使用不僅能延長色譜柱的使用壽命,還能有效保證實驗結(jié)果。

 

以下簡單介紹液相色譜柱

在使用過程中應(yīng)當(dāng)注意的問題

 

01

性能測試

 

新色譜柱使用前,應(yīng)進行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考依據(jù) (柱性能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異有所不同,在測試中需保證方法一致性)。

 

02

流動相的配制

 

液相色譜是通過樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:

 

  • 流動相對樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時間保留在柱中)。

  • 流動相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)。

  • 流動相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時既能得到好的分離效果,同時又降低柱壓,延長柱子的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

  • 流動相的物化性質(zhì)與使用的檢測器相適應(yīng)。

  • 流動相沸點不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實驗無法進行。

  • 流動相配制好后,一定要進行脫氣,除去溶解在流動相中的微量氣體。

 

03

新色譜柱使用前沖洗步驟

 

1、首先查看色譜柱的說明書,注意色譜柱封存的溶劑、推薦流速、pH值、耐受柱壓、及使用溫度等信息。

2、如分析使用的流動相與色譜柱內(nèi)儲存的溶劑混溶,可以直接使用流動相參照色譜柱說明書中推薦的流速、溫度等條件沖洗色譜柱20倍柱體積以上。如果分析條件使用的流動相與色譜柱內(nèi)儲存的溶劑不混溶,請選擇與色譜柱內(nèi)儲存溶劑和流動相都混溶的溶劑,作為置換溶劑,逐步置換到分析使用的流動相。每次置換均應(yīng)沖洗色譜柱20倍柱體積以上。

  

04

日常使用注意事項

 

1、請使用HPLC級別以上的試劑作為流動相。

2、流動相要用0.45um孔徑以下的微孔濾膜濾過。

3、流動相的pH值不能超出色譜柱的適用范圍。

4、注意流動相的流動方向要與色譜柱標(biāo)識的方向一致。

5、容易滋生微生物的流動相不要存放過久,要及時換新,以免微生物滋生污染色譜柱。

6、色譜柱分析結(jié)束后要及時*沖洗。

7、長時間不用的色譜柱要將流動相置換為色譜柱保存的溶劑,并兩端用堵頭封死保存。

8、色譜柱要避免劇烈碰撞、跌落等。

 

 

05

流動相流速的選擇

 

因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不用的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱,要追求較佳柱效,應(yīng)使用*流速。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般選擇1mL/min,對于內(nèi)徑4.0mm柱,流速0.8mL/min為更佳。當(dāng)選用*流速時,分析時間可能延長。可采用改變流動相的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時,可適當(dāng)增加有機試劑甲醇或乙腈的含量)。

 

液相色譜柱在色譜分析中起著至關(guān)重要的角色,是樣品分離的核心,正確使用色譜柱才能達(dá)到更好的理想的分離效果,提高色譜柱的使用壽命。

 

 

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