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脊髓性肌萎縮癥（SMA）

脊髓性肌萎縮癥（SMA），是一類由脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性導(dǎo)致肌無(wú)力、肌萎縮的疾病。由運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元功能基因(SMN1) 隱性突變引起，屬常染色體隱性遺傳病，臨床并不少見。主要臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性、對(duì)稱性，肢體近端為主的廣泛性弛緩性麻痹與肌萎縮，智力發(fā)育及感覺均正常。

SMN1基因編碼存活運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元（SMN）蛋白 ——一種遍布全身的蛋白質(zhì)，對(duì)于運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)胞的結(jié)構(gòu)維持和功能至關(guān)重要。大腦和脊髓中的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元控制整個(gè)身體的肌肉運(yùn)動(dòng)。如果沒有足夠的功能性SMN蛋白，那么運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元就會(huì)死亡，導(dǎo)致衰弱且通常致命的肌肉無(wú)力。由SMN1基因突變引起的SMA通常根據(jù)發(fā)病年齡和嚴(yán)重程度分為幾種亞型；其中嬰兒發(fā)病的SMA是嚴(yán)重和常見的亞型?；加羞@種疾病的兒童頭部抬頭，吞咽和呼吸都有問(wèn)題。這些癥狀可能在出生時(shí)出現(xiàn)，也可能在6個(gè)月后出現(xiàn)。

近十年來(lái)，在針對(duì)SMA患者的治療策略方面取得了顯著進(jìn)展：2016年12月Nusinersen反義寡核苷酸療法迅速獲得FDA批準(zhǔn)用于所有年齡的SMA患者，可提高SMN蛋白表達(dá)并改善輕度SMA兒童和青少年的運(yùn)動(dòng)功能；2019年5月批準(zhǔn)的靜脈注射表達(dá)SMN1 cDNA (scAAV9-SMN)的 重組腺相關(guān)病毒基因療法onasemnogene abeparvovec-xioi用于提高2歲及以下嬰兒的生存和運(yùn)動(dòng)機(jī)能。

因?yàn)镾MN水平無(wú)法在活著的患者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中測(cè)量，有關(guān)疾病相關(guān)的SMN表達(dá)水平變化和與疾病相關(guān)的數(shù)據(jù)很少。了解SMN在正常和患病人群、以及發(fā)展治療過(guò)程中的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化將有助于進(jìn)一步優(yōu)化臨床治療。

來(lái)自約翰霍普金斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院的研究人員對(duì)臨床SMA患者進(jìn)行分組，對(duì)分離的人的腦、脊髓、髂腰肌、隔膜、肝等組織中SMN mRNA和蛋白水平分別進(jìn)行了量化動(dòng)態(tài)檢測(cè)。其中，采用HTRF®（均相時(shí)間分辨熒光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行不同組織的SMN蛋白定量檢測(cè)。研究發(fā)現(xiàn)圍產(chǎn)期全組織SMN蛋白水平正常下降，這支持臨床上在出生后要盡快開始SMN誘導(dǎo)治療；部分患者由于ASOs（反義核苷酸）在脊柱和大腦吻側(cè)區(qū)域的分布有限，可能限制了這些區(qū)域的運(yùn)動(dòng)單元對(duì)這些患者的臨床反應(yīng)。這些結(jié)果對(duì)SMA患者的優(yōu)化治療具有重要意義，并為進(jìn)一步研究提高鞘內(nèi)注射ASOs的生物利用度提供了依據(jù)。

文章技術(shù)路線：

HTRF定量脊髓標(biāo)本中SMN蛋白的表達(dá)數(shù)據(jù)(對(duì)照組為75例;n = 16例SMA，患者年齡從15周妊娠(GA)到168個(gè)月不等)，如下圖所示：

HTRF實(shí)驗(yàn)方法:

HTRF®（均相時(shí)間分辨熒光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence）技術(shù)基于時(shí)間分辨熒光（TRF）和熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）兩大技術(shù)原理。將熒光的靈敏性、均相免洗和低背景等特點(diǎn)結(jié)合在一起。廣泛用于GPCRs，激酶，細(xì)胞因子，磷酸化蛋白，表觀遺傳，生物大分子（抗體）等靶點(diǎn)的檢測(cè)和定量。

HTRF SMN assay kit：將10 μL細(xì)胞裂解液轉(zhuǎn)移到96/384淺孔板中，加入5μL的熒光供體（Donor）和5 μL的熒光受體(Acceptor)。孵育過(guò)夜后，直接在EnVision多模式讀板儀(PerkinElmer)或其他HTRF®兼容的酶標(biāo)儀上進(jìn)行讀值即可。

珀金埃爾默公司一如既往的為用戶提供客制化高靈敏度檢測(cè)試劑和高品質(zhì)的檢測(cè)設(shè)備：

EnVision多標(biāo)記微孔板讀板儀

EnSight多標(biāo)記微孔板讀板儀

Victor Nivo多標(biāo)記微孔板讀板儀

參考文獻(xiàn)

1. Ramos, Daniel M., et al. "Age-dependent SMN expression in disease-relevant tissue and implications for SMA treatment." Journal of Clinical Investigation 129.11 (2019): 4817-4831.