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　　一、簡介
 

　　蛋白質(zhì)的測定方法，目前仍以1883年凱達爾氏(Kiedahl)發(fā)明的定氮法為基礎(chǔ)，它根據(jù)各種蛋白質(zhì)都具有固定比數(shù)的氮這一事實，通過對氮的測定而推算出蛋白質(zhì)含量，此法所得的含氮量除了確定屬于蛋白質(zhì)組成成分的氮以外，還包括非蛋白質(zhì)組成的其他有機及無機態(tài)氮，所以換算所得的蛋白質(zhì)含量稱作為粗蛋白含量，一般蛋白質(zhì)中的含量為18%，換算后即每6.25克蛋白質(zhì)中含有1克氮，因此6.25成為換算系數(shù)K，但是不同的農(nóng)產(chǎn)品及其制品的實際含氮量有區(qū)別，所以不同農(nóng)產(chǎn)品必須采用不同的換算系數(shù)，如花生、大豆、蠶豆、大麥、小麥、燕麥、黑麥等含氮為17.6%，求得K=5.7，蕎麥、葵花籽、亞麻籽、麻籽、棉花籽、蓖麻籽等換算系數(shù)則為K=5.50，玉米、菜籽為6.00，水稻為5.95，上述以外的其他農(nóng)產(chǎn)品的換算系數(shù)均適用6.25。盡管如此，目前世界上還沒有直接分離測定含蛋白質(zhì)的可行方法。因此，迄今為止在國內(nèi)外凱氏定氮法仍然是測定蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法。所得結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定。
 

　　山東盛泰儀有限公司生產(chǎn)的全自動定氮儀(蛋白質(zhì)測定儀)，是引進消化吸收國內(nèi)外檢測新技術(shù)，結(jié)合我國國情，應(yīng)用凱氏定氮法原理，采用化學(xué)與物理學(xué)相結(jié)合完成的成套蛋白質(zhì)含量快速測定裝置。為糧食、食品、飼料、農(nóng)業(yè)、商檢等檢測部門提供了理想的檢測設(shè)備。
 

　　二、操作方法  山東盛泰儀器有限公司廠家直供
 

　　1.試劑制備
 

　　A.硫酸(比重1.84)
 

　　B.NaOH溶液:400g NaOH 溶于1000mlH2O中
 

　　C.2%H3BO3
 

　　D.0.1NHCL
 

　　E. 催化劑:硒+*(1:1000)或硫酸銅等
 

　　F.指示劑:0.1%甲基紅+0.5%溴甲酚綠(1:1)
 

　　2.樣品消化
 

　　稱取經(jīng)粉碎通過40-60目/寸樣0.5-1克(視含氮量而定)無損地置入已洗滌烘干的消化管中加催化劑5克左右和10ml左右硫酸。 將消化管分別放入消化架各個孔內(nèi)，然后置于消化爐上，然后開啟抽氣三通上自來水，使抽氣三通處于吸氣狀態(tài)，接通電源，在加熱初始階段防止樣品飛濺。(選用電壓型控溫的消化爐起先控制在150伏左右，15分鐘左右后可滿電壓工作)，(選用數(shù)顯型消化爐起先控制在200度左右，20分鐘左右后再設(shè)定所需溫度)。
 

　　3.蒸餾(結(jié)構(gòu)圖上有Δ標(biāo)記工作必需做)
 

　　(ST-O4A為例)蒸餾器中，堿液及蒸餾水采用電磁泵加入，機器側(cè)面標(biāo)簽NaOH、H2O注入接口用橡膠管套入后分別置入自備的容器中，加液時按面板上相應(yīng)開關(guān)，液體由泵吸入消化管內(nèi)，注入毫升數(shù)視標(biāo)尺所注位置而定。(一般堿液加量是消化時硫酸用量5倍以上，加蒸餾水量15毫升左右)
 

　　1.打開電源，打開自來水，接冷卻水自來水不必開過大，出水口有水流出即可，用排水管子上夾子夾緊排水管子。
 

　　2.在250mL三角接收瓶中加入50mL2%H3BO3和2-3滴混合指示劑，蒸餾時間設(shè)定6-8分鐘，并使接收瓶托架盤往上移，使滴管浸沒在液體中，然后按時控開關(guān)(也可不用開)。
 

　　3.向上扳動側(cè)面紅球手柄把消化管固定在左邊托架上，然后按面板上開關(guān)分別加入H2O、NaOH 液體，然后上推蒸氣開關(guān)，向試管內(nèi)注入蒸氣，進行蒸餾樣品，在接收瓶內(nèi)接收液達150mL左右時移下接收瓶，用蒸餾水沖洗滴管口繼續(xù)蒸餾半分鐘，然后取下接收瓶，待滴定用，關(guān)蒸氣開關(guān)。第二個樣品只要放上后，加好液，上推蒸氣開關(guān)既可，不要關(guān)電源。
 

　　4.滴定.
 

　　用0.1NHCL滴定接收瓶內(nèi)的溶液，滴定溶液由綠色變成淡紫色時為止，記下消耗HCL的毫升數(shù)，按下列式子計算蛋白含量：
 

　　蛋白含量(%)=(V-V0)N  0.014  A  100
 

　　————————————
 

　　W
 

　　式中：V----消耗HCL的毫升數(shù)
 

　　V0-----空白實驗時消耗HCL的毫升數(shù)
 

　　N----- HCL的當(dāng)量濃度
 

　　0.014----1ml HCL的克當(dāng)量數(shù)
 

　　A---固定系數(shù)(6.25、5.7、5.3等)
 

　　W----試樣重量g (空白測定：用0.1克糖代替樣品或不加樣品作空白測定)
 

　　4、關(guān)機
 

　　關(guān)電源、關(guān)水、打開排水夾子，兩紅球開光上推，取下消化管，擦干凈機器。