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PCR反應(yīng)體系的配置方式有時也會影響反應(yīng)的正常進(jìn)行。常規(guī)方法與其它酶學(xué)反應(yīng)一樣,在后加入DNA聚合酶。早期的PCR儀沒有帶加熱的蓋子,要求在反應(yīng)液上覆蓋一層礦物油,防止水分蒸發(fā)。
對于使用具3’-5’外切活性的高溫DNA聚合酶時,有時會擴(kuò)增不出產(chǎn)物。在遇到這個問題時,如果將反應(yīng)成分分開配制,A管含模板、引物和dNTP,以及調(diào)整體積的H2O,B管含緩沖液、DNA聚合酶和水,然后再將兩管溶液混合起來,可較好地克服這個問題。
按照常規(guī)的方法配制反應(yīng)體系,有時會出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的問題。熱啟動(hotstart)PCR操作方式可較好解決這一問題。將dNTP、緩沖液,Mg2+和primer先配制好,然后加入一粒蠟珠(如AmpliWaxPCRQam100),加熱熔化,再冷卻,使蠟將溶液封住,后加入模板和DNA聚合酶等剩余成分。只有當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)入高溫階段后,蠟層熔化,所有反應(yīng)成分才會混合在一起。
已開封或者使用后,剩余試劑仍需按照試劑瓶標(biāo)簽所示的溫度保存,ELISA檢測試劑盒開封后的酶標(biāo)板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。
根據(jù)我司規(guī)定未開封的試劑盒:所有試劑均按試劑瓶標(biāo)簽上所示保存。請注意,收到試劑盒后請盡快將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A、檢測溶液B以及96孔板保存于-20℃。
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