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更多>反相色譜流動(dòng)相中甲醇和乙腈有什么區(qū)別?
在反相色譜中,甲醇和乙的二種有機(jī)試劑,由于二者性質(zhì)的差異,在使用中有一定的區(qū)別。
1價(jià)格,乙腈高于甲醇
在分析成本上,HPLC級(jí)的乙腈,價(jià)格比HPLC級(jí)的甲醇高的多。因此,一般的液相色譜分析有機(jī)試劑甲醇為多。但文獻(xiàn)所示的條件多用乙腈。
2吸光度,乙腈低于甲醇
所謂的HPLC級(jí)是指除去具有吸收UV的物質(zhì),其在規(guī)定的吸收波長(zhǎng)上的吸光度小于規(guī)格值,但并不是指的純度高。
從這四種試劑的吸收光譜看,HPLC級(jí)的乙腈吸收小,尤其在低波長(zhǎng)上。因此在UV檢測(cè)時(shí),其產(chǎn)生的噪音小,在低波長(zhǎng)尤其明顯。所以在UV的低波長(zhǎng)上,高靈敏度檢測(cè)用HPLC的乙腈合適。另外,在UV的梯度檢測(cè)上,HPLC的乙腈產(chǎn)生的鬼峰少,同時(shí)由于其低的吸收值,梯度變化其吸收值變化小,較大范圍內(nèi)的反相有機(jī)試劑梯度用HPLC乙腈適宜。
甲醇的HPLC級(jí)和優(yōu)級(jí)的吸收光譜相差不大,但優(yōu)級(jí)不能保證吸光度,因此還是盡量使用HPLC級(jí)。
3壓力,乙腈低于甲醇
色譜柱內(nèi)的壓力,同很多因素有關(guān),包括長(zhǎng)度、內(nèi)徑、顆粒大小、填料性質(zhì)、流速、溫度及流動(dòng)相等。但在實(shí)際分析過(guò)程中,影響壓力變化主要是流動(dòng)相中有機(jī)溶劑和緩沖液混合比例的不同,圖中表示了水/乙腈,水/甲醇混合液的比例與壓力的關(guān)系。從圖中可以看到,甲醇與水混合壓力增高,而乙腈同樣與水混合并不如此,乙腈明顯優(yōu)于甲醇。同時(shí)我們也看到溫度對(duì)壓力的影響,溫度升高,壓力下降。
4流動(dòng)相脫氣,乙腈要注意
這里只討論預(yù)先混合的流動(dòng)相配置問(wèn)題。甲醇與水混合時(shí)會(huì)發(fā)熱,溫度升高,多余溶解的空氣較易變?yōu)槊摮鰵馀?,容易脫氣。而乙腈與水混合是吸熱反應(yīng),隨著溫度慢慢回到室溫,產(chǎn)生氣泡,所以要考慮脫氣。
5洗脫強(qiáng)度,一般而言,乙腈大于甲醇
乙腈和甲醇與水混合二者比例相同,一般情況下,乙腈的洗脫能力強(qiáng),尤其是混合比例低時(shí)。例如從和*的洗脫看,相同的保留時(shí)間,乙腈的比率只需甲醇的一半都不到,而另一方面,當(dāng)有機(jī)溶劑100%或與此非常接近時(shí),對(duì)于胡蘿卜素和膽甾醇來(lái)看,甲醇的洗脫能力往往比乙腈強(qiáng)。
6分離選擇性,有差異
乙腈和甲醇在分離的選擇性上有一定的差異,尤其是極性或離子化合物,出峰次序往往會(huì)不一致。在圖4中,*和苯甲酸的洗脫次序改變。這是由于有機(jī)溶劑的化學(xué)性質(zhì)不同所致(甲醇是質(zhì)子性,乙腈是非質(zhì)子性)。因此,當(dāng)用乙腈(甲醇)不能獲得良好分離時(shí)可以試試甲醇(乙腈)。
7峰形,有時(shí)出現(xiàn)差異
對(duì)于像水楊酸化合物等,用乙腈時(shí)脫尾大,用甲醇則可抑制脫尾。這是由于對(duì)于硅表面與目標(biāo)成分有相互作用的流動(dòng)相的有關(guān)方,因有機(jī)溶劑分子的化學(xué)性質(zhì)不同而異,或者是對(duì)成分溶解能力的差異所造成的。
可是,一般情況下,聚合物反相柱在使用甲醇時(shí)比硅膠柱更具有峰形寬的傾向,特別是用聚苯乙稀柱分析芳香族化合物時(shí)常見(jiàn),而用乙腈則效果好的多。
8結(jié)論
總之,對(duì)于反相色譜中常用的乙腈和甲醇,一般情況下使用HPLC乙腈效果,但用乙腈達(dá)不到效果時(shí),可以試試HPLC級(jí)甲醇。
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