準(zhǔn)備物品：PBS、吸管、細(xì)胞凍存液、恒溫培養(yǎng)箱 細(xì)胞凍存液：DMSO：FBS=1:4 步驟：
1.吸出培養(yǎng)基，用PBS清洗兩遍，應(yīng)*清除培養(yǎng)基，否則會影響胰酶的消化作用；
2.加入2-3ml胰酶（75cm規(guī)格培養(yǎng)瓶）至培養(yǎng)瓶中，放入37℃恒溫培養(yǎng)箱中，消化2-3min，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)由梭形變?yōu)閳A形，立即加入3-6ml*培養(yǎng)基終止消化；
3.用吸管輕柔吹打內(nèi)壁數(shù)次幫助細(xì)胞脫落，將細(xì)胞懸液收集至15ml離心管中，1000rpm離心6-8min，
4.沿細(xì)胞沉淀方向緩慢傾倒液體，加入500μl的培養(yǎng)基重懸，用加樣槍將細(xì)胞懸液移至凍存管內(nèi)；
5.在凍存管內(nèi)加入等量凍存液，為避免DMSO對細(xì)胞的損傷過大，凍存液應(yīng)一滴一滴的加入，后混勻。
6.直接裝入凍存盒內(nèi)，放入-80℃冰箱 ；
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