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　　一、實驗目的
 

　　掌握利用種子作為外植體進行快速繁殖的方法；掌握試管花卉的培養(yǎng)技術(shù)；了解植物開花的影響因素。
 

　　二、實驗原理
 

　　試管開花是指用組織培養(yǎng)的方法，使植物開花的過程在培養(yǎng)容器中完成。一般情況下，植物必須達到某種成熟階段時才能開花。自1946年羅士韋在對菟絲子莖尖培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)了花器官的形成后，植物組織培養(yǎng)技術(shù)已用于植物離體開花的研究。影響試管開花的因素主要有外植體，外源植物激素，營養(yǎng)水平和環(huán)境因素等4個方面。通過改變培養(yǎng)基中外源植物激素、營養(yǎng)水平和培養(yǎng)環(huán)境條件，可以誘導培養(yǎng)物在試管內(nèi)開花。
 

　　試管花卉作為高新技術(shù)與工藝生產(chǎn)相結(jié)合的新生物, 不僅在理論研究上有重要作用, 而且可以利用成花決定因素的研究來培養(yǎng)能迅速進入生殖階段的試管苗或有觀賞價值的試管花卉, 并將這一技術(shù)直接應用于花卉生產(chǎn)。試管花卉有較大市場前景,
 

　　目前可以做成試管花卉的植物有石斛蘭、龍角、波露、短葉蘆薈、美麗十二卷、雞冠花、玫瑰、紅蓮、鳳梨、大花蕙蘭、狼牙掌、燕尾蘆薈、非洲紫羅蘭、下城蘆薈、金線蓮、迎春、六月雪、紅葉李、無刺火棘、紫薇、情人草、康乃馨、幸運草、草莓、非洲菊、文心蘭等。
 

　　三、實驗器具與藥品
 

　　①器材：電子天平、托盤天平、燒杯(50ml, 100ml, 500ml, 1000ml)、量筒(1000ml,100ml, 25ml)、容量瓶(1000ml,500ml,100ml)、藥勺、稱量紙、玻璃棒、滴管、電爐、冰箱、人工氣候箱、移液槍、pH計、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、鑷子、酒精燈、棉球、三角瓶、培養(yǎng)皿。
 

　?、谠噭篗S培養(yǎng)基各種母液、PP333、KT、6-BA、NAA、IAA、蔗糖、瓊脂、酒精、HgCl2。
 

　　③以矮生雞冠花品系的種子為試材。
 

　　四、實驗內(nèi)容與操作步驟
 

　　1、培養(yǎng)基的配制
 

　?、俜N子萌發(fā)培養(yǎng)基：MS基本培養(yǎng)基
 

　?、谠鲋撑囵B(yǎng)基：MS+NAA 0.1mg·L-1+6-BA 1.0mg·L-1+ 蔗糖20 g·L-1+ 瓊脂10 g·L-1
 

　?、墼嚬荛_花誘導培養(yǎng)基：MS+ PP333 0.5mg·L-1+NAA 0.01mg·L-1+ 蔗糖20 g·L-1+ 瓊脂10g·L-1
 

　　2、種子滅菌
 

　　先用洗潔精洗凈種子， 用自來水流水沖洗干凈；再用0.1% HgCl2浸泡10 min，后用無菌水反復沖洗5 遍。在超凈工作臺上將滅菌后的種子接種到MS 培養(yǎng)基上，每三角瓶接種5-10個外植體。人工氣候箱條件為：光照12h·d-1、光照強度1500Lx、溫度25～26℃。14d 后統(tǒng)計種子發(fā)芽率和污染率。
 

　　3、增殖培養(yǎng)
 

　　當無菌苗長到約2cm 時，取其中約1cm 芽段， 接種到②增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)26 d 后統(tǒng)計其增殖倍數(shù)。
 

　　4、開花誘導
 

　　將高約2～3cm的試管苗，轉(zhuǎn)到③試管開花誘導培養(yǎng)基中，人工氣候箱條件：日溫(25±2)℃，夜溫(20±2)℃，光照強度1500～3000lx，光照時間12h/d，接種30d后觀察統(tǒng)計試管內(nèi)開花情況。
 

　　五、實驗結(jié)果
 

　　觀察試驗結(jié)果，報告種子發(fā)芽率和污染率、增殖倍數(shù)和試管開花情況。