凍存的細(xì)胞該如何開(kāi)始培養(yǎng)？
(1) 將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。
(2) 用10秒鐘時(shí)間將小管的蓋子擰松1/4以去除殘留在螺紋處的液氮，然后將蓋子蓋緊。
(3) 將小管放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化。
(4) 將小管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無(wú)菌環(huán)境。
(5) 用70％的酒精沖洗小管，然后擦去多余酒精。
(6) 打開(kāi)蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋。用1ml離心管離心內(nèi)容物。
(7)平衡管內(nèi)物，用多聚賴(lài)氨酸包被培養(yǎng)瓶(多數(shù)細(xì)胞用T-75的培養(yǎng)瓶)。多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型推薦接種密度為每平方厘米5000細(xì)胞。
(8) 蓋好蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開(kāi)蓋子。
(9) 將培養(yǎng)瓶放放培養(yǎng)箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)
(10) 植入培養(yǎng)后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。