時間沒有等我,是你忘了帶我走 ,我左手過目不忘的的螢火,右手里是十年一個漫長的打坐。轉(zhuǎn)眼2019年已經(jīng)接近尾聲了,關(guān)于免疫組化問題,上海古朵生物一一為您解答
1、染色過強
原因及相關(guān)解決方法
a 抗體濃度過高或孵育時間過長 降低抗體滴度、抗體孵育時間:室溫1小時或4度過夜
b 孵育溫度過高超過37度 一般在室溫20-28度
c DAB顯色時間過長或濃度過高 顯色時間不超過5-12分鐘,以顯微鏡下觀察為準
2、非特異性背景染色
原因及相關(guān)解決方法
a 操作過程中沖洗不充分: 每步?jīng)_洗3次每次5分鐘
b 組織中含過氧化物酶未阻斷 :可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長
c 組織中含內(nèi)原性*:正常非免疫動物血清再封閉
d 血清蛋白封閉不充分:延長血清蛋白封閉時間
3、染色弱
原因及相關(guān)解決方法
a 抗體濃度過低、孵育時間過短:提高抗體濃度、孵育時間不能少 于60分鐘
b 試劑超過有效使用時間: 應更換試劑
c 操作中添加試劑時緩沖液未瀝干 :每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
使試劑稀釋 (應防止切片干燥)
d 室溫太低 :低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過夜
e 蛋白封閉過度:封閉不要超過12分鐘
4、染色陰性
原因及相關(guān)解決方法
a 操作步驟錯誤:應重試設(shè)陽性對照
b 組織中無抗原:設(shè)陽性對照以驗證試驗結(jié)果
c 一抗與二抗種屬連接錯誤:仔細確定一抗二抗種屬無誤
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