常用染色液的配置方法步驟
一、呂氏(Loeffler)堿性美藍(lán)染液
A液:美藍(lán)(methyleneblue)0.6 g
95%酒精30 ml
B液:KOH 0.01 g
蒸餾水:100 ml
分別配制A液和B液,配好后混合即可。
二、齊氏(Ziehl)石炭酸復(fù)紅染色液
A液:堿性復(fù)紅(basicfuchsin)0.3 g
95%酒精 10 ml
B液:石炭酸 5.0 g
蒸餾水 95 ml
將堿性復(fù)紅在研缽中研磨后,逐漸加入95%酒精,繼續(xù)研磨使其溶解,配成A液。
將石炭酸溶解于水中,配成B液。
混合A液及B液即成。通常可將此混合液稀釋5-10倍使用,稀釋液易變質(zhì)失效,一次不宜多配。
三、革蘭氏(Gram)染色液
1. 草酸銨結(jié)晶紫染液
A液:結(jié)晶紫(crystalviolet)2 g
95%酒精20ml
B液:草酸銨(ammoniumoxalate)0.8 g
蒸餾水80 ml
混合A、B二液,靜置48小時(shí)后使用。
2. 盧戈氏(Lugol)dian液
dian片1.0 g
dian化鉀2.0 g
蒸餾水300 ml
先將dian化鉀溶解在少量水中,再將dian片溶解在dian化鉀溶液中,待dian全溶后,加足水分即成。
3. 95%的酒精溶液。
4. 番紅復(fù)染液
番紅(safranineO)2.5 g
95%酒精 100 ml
取上述配好的番紅酒精溶液10 ml 與80 ml 蒸餾水混勻即成。
四、芽孢染色液
1. 孔雀綠染液
孔雀綠(malachitegreen)5 g
蒸餾水 100 ml
2. 番紅水溶液
番紅 0.5 g
蒸餾水 100 ml
3. *品紅溶液
堿性品紅 11 g
* 100 ml
制法取上述溶液10 ml 與100 ml 5%的*溶液混合,過濾備用。
4. 黑色素(nigrosin)溶液
水溶性黑色素10 g
蒸餾水 100 ml
稱取10 g 黑色素溶于100 ml 蒸餾水中,置沸水浴中30分鐘后,濾紙過濾
二次,補(bǔ)加水到100 ml,加0.5 ml 甲醛,備用。
五、莢膜染色液
1. 黑色素水溶液
黑色素 5 g
蒸餾水 100 ml
福爾馬林(40%甲醛)0.5 ml
將黑色素在蒸餾水中煮沸5分鐘,然后加入福爾馬林作防腐劑。
2. 番紅染液
與革蘭氏染液中番紅復(fù)染液相同。
六、鞭毛染色液
A液:?jiǎn)螌幩? g
FeCl3 1.5 g
蒸餾水 100 ml
福爾馬林(15%)2.0 ml
NaOH(1%)1.0 ml
配好后,當(dāng)日使用,次日效果差,第三日則不宜使用。
B液:AgNO3 2 g
蒸餾水 100 ml
待AgNO3溶解后,取出10 ml 備用,向其余的90 ml AgNO3中滴入濃NH4ON,使之成為很濃厚的懸浮液,再繼續(xù)滴加NH4OH,直到新形成的沉淀又重新剛剛?cè)芙鉃橹?。再將備用?0ml AgNO3慢慢滴入,則出現(xiàn)薄霧,但輕輕搖動(dòng)后,薄霧狀沉淀又消失,再滴入AgNO3,直到搖動(dòng)后仍呈現(xiàn)輕微而穩(wěn)定的薄霧狀沉淀為止。如所呈霧不重,此染劑可使用一周,如霧重,則銀鹽沉淀出,不宜使用。
七、富爾根氏核染色液
1. 席夫氏(Schiff)試劑
將1 g堿性復(fù)紅加入200 ml 煮沸的蒸餾水中,振蕩5分鐘,冷至50℃左右過濾,再加入1 mol/L HCl 20 ml,搖勻。待冷至25℃時(shí),加Na2S2O5(偏重亞硫酸鈉) 3 g,搖勻后裝在棕色瓶中,用黑紙包好,放置暗處過夜,此時(shí)試劑應(yīng)為淡黃色(如為粉紅色則不能用),再加中性活性炭過濾,濾液振蕩1分鐘后,再過濾,將此濾液置冷暗處備用(注意:過濾需在避光條件下進(jìn)行)。
在整個(gè)操作過程中所用的一切器皿都需十分潔凈、干燥,以消除還原性物質(zhì)。
2. Schandium固定液
A液:飽和sheng汞水溶液
50 ml sheng汞水溶液加95%酒精25 ml 混合即得。
B液:冰醋酸
取A液9毫升+B液1毫升,混勻后加熱至60℃。
3. 亞硫酸水溶液
10%偏重亞硫酸鈉水溶液5 ml,1 mol/L HCl 5 ml,加蒸餾水100 ml 混合即得。
八、Bouin氏固定液
苦wei酸飽和水溶液75 ml
福爾馬林(40%甲醛)25 ml
冰醋酸5 ml
1 g 苦wei酸可制成75 ml 飽和水溶液。
先將苦wei酸溶解成水溶液,然后再加入福爾馬林和冰醋酸搖勻即成。
九、乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液
石炭酸10 g
乳酸(比重1.21)10 ml
甘油 20 ml
蒸餾水 10 ml
棉藍(lán)(cottonblue)0.02 g
將石炭酸加在蒸餾水中加熱溶解,然后加入乳酸和甘油,zui后加入棉藍(lán),使其溶解即成。
十、瑞氏(Wright)染色液
瑞氏染料粉末 0.3 g
甘油 3 ml
甲醇 97 ml
將染料粉末置于干燥的乳缽內(nèi)研磨,先加甘油,后加甲醇,放玻璃瓶中過夜,過濾即可。
十一、美藍(lán)(Levowitz-Weber)染液
在52 ml 95%酒精和44 ml 四氯乙烷的三角燒瓶中,慢慢加入0.6 g 氯化美藍(lán)(methylenebluechloride),旋搖三角燒瓶,使其溶解。放5~10℃下,12~24小時(shí),然后加入4 ml 冰醋酸。用質(zhì)量好的濾紙如WhatmanNo.42或與之同質(zhì)量的濾紙過濾。貯存于清潔的密閉容器內(nèi)。