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質譜免疫組化對抗體有什么要求嗎?

時間:2018-12-25閱讀:1097
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年初《Nature》雜志展望 2018 年生物醫(yī)學技術突破,作為「technology to watch in 2018」——質譜流式細胞技術(CyTOF),很多國內外大咖已經聚焦這項技術。質譜流式技術(CyTOF)可以對數(shù)百萬細胞進行超過 40 個參數(shù)的單細胞分析,讓研究更加全面、深入。

質譜流式

與傳統(tǒng)流式技術相比,質譜流式采用非放射性的穩(wěn)定重金屬同位素作為抗體的標簽,達到同時測量單細胞中多個靶點的目標,高純度金屬同位素確保了低的背景以及小的信號重疊。

 

質譜流式原理

 

質譜流式技術需要用到金屬偶聯(lián)標記的抗體。抗體質量,尤其是特異性是后續(xù)實驗成功的關鍵。使用經過嚴格標準驗證的抗體,能大大提高實驗成功率。


質譜免疫組化

 

基于 CyTOF 技術,質譜流式成像技術 Imaging Mass Cytometry™ 將質譜流式(CyTOF)超高檢測通道數(shù)量的優(yōu)勢在組織成像研究中大化,其性能遠遠超越了傳統(tǒng)的免疫組化或者免疫熒光技術。目前通過單次掃描即可獲得組織切片樣本上 4-37 種蛋白標記物的圖像數(shù)據(jù),準確反映了蛋白及對應的細胞在組織微環(huán)境中的表型和相互關系等多方面綜合全面的信息,特別是針對一些珍貴的 FFPE 樣本或冰凍組織切片,可以在亞細胞水平進行更深入的分析。

 

1、這么牛的技術對抗體有什么要求嗎?

一般而言,常規(guī)的一抗,儲存液中都包含BSA、甘油、等可能會干擾部分偶聯(lián)標記化學反應的成分。這些干擾成分在常規(guī)的無需對抗體進行改造的實驗中能提高抗體的穩(wěn)定性、降低移液損失和冰凍造成的效價降低。但是在抗體偶聯(lián)標記類實驗(包含金屬標記反應)中可能會造成標記效率降低的問題。所以,CyTOF 需要無載體緩沖液的抗體形式,不包含 BSA、甘油、疊氮鈉等可能干擾重金屬標記反應的抗體緩沖液。

 

2、CST 是否可以提供 CyTOF 定制抗體?

CST 可以提供這種定制形式的抗體可直接儲存在 PBS 緩沖液中,并且可以定制成更高抗體濃度(部分可能以 >1 mg/ml 濃度提供)的產品,便于后續(xù)進行偶聯(lián)標記反應。

 

3、如何提高 CST 的抗體做 CyTOF 的成功率?

雖然目前質譜流式技術不在 CST 標準內部應用驗證流程中,如果您遵循以下建議,很有可能提高該實驗的成功率。

 

若采用 Helios™ 平臺進行實驗,可優(yōu)先考慮從 CST 的 Flow 驗證過的抗體目錄中進行選擇。

 

若采用 Imaging Mass Cytometry™ 平臺,您選擇的抗體應與樣品制備方法相匹配。對于石蠟切片樣品,可優(yōu)先考慮從 CST 的 IHC-P 或 IF-P 應用驗證的抗體目錄中進行選擇。對于冷凍組織切片,可優(yōu)先考慮從 CST 的 IF-F 或 IHC-F 應用驗證的抗體目錄中進行選擇。

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