1.     型號：LC-10AT   產(chǎn)地 日本島津

L C - 10A T 液相色譜儀是日本島津公司1996 年的產(chǎn)品, 檢測器為可變波長紫外檢測器, 色譜柱為島津公司的ODS - C18 。

2.     用途：

液相色譜法只要求樣品能制成溶液, 不受樣品揮發(fā)性的限制,流動相可選擇的范圍寬,固定相的種類繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
    與試樣預處理技術(shù)相配合，HPL C 所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展, 有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。由于HPL C具有高分辨率、高靈敏度、速度快、可反復利用, 流出組分易收集等優(yōu)點,因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領(lǐng)域。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。

3.     測定原理

液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱（固定相） 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對運動時, 經(jīng)過反復多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。

4.     使用方法

4.1     系統(tǒng)組成：本系統(tǒng)由1個LC-10ATvp溶劑輸送泵、Rheodyne 7725i手動進樣閥、SPD-10Avp紫外-可見檢測器、色譜數(shù)據(jù)工作站和電腦等組成，另外還包括打印機、不間斷電源等輔助設(shè)備。

4.2      準備
4.2.1 準備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲波脫氣20min。
4.2.2 根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）和定量環(huán)。
4.2.3 配制樣品和標準溶液（也可在平衡系統(tǒng)時配制），用合適的0.45μm濾膜過濾。
3.2.4 檢查儀器各部件的電源線、數(shù)據(jù)線和輸液管道是否連接正常，特別注意輸液管道內(nèi)是否有氣泡。

4.3      開機：接通電源，依次開啟不間斷電源、溶劑輸送泵、先將機器預熱半小時，這時的流動相用85％甲醇溶液（已脫氣），而且要時刻注意輸液管道內(nèi)是否有氣泡，如有氣泡要進行排氣。預熱半小時后，開啟檢測器，待檢測器自檢結(jié)束后，打開打印機、電腦顯示器、主機，zui后打開色譜工作站。

4.4      各種參數(shù)設(shè)定
4.4.1 波長設(shè)定：在檢測器顯示初始屏幕時，按[func]鍵，用數(shù)字鍵輸入所需波長值，按[Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出到初始屏幕。
4.4.2 流速設(shè)定：在輸送泵顯示初始屏幕時，按[func]鍵，用數(shù)字鍵輸入所需的流速（柱在線時流速一般不超過1ml/min），按[Enter]鍵確認。按[CE]鍵退出。

4.5      更換流動相并排氣泡
4.5.1 將輸送管道的吸濾器放入裝有準備好的流動相的儲液瓶（已排氣）中；
4.5.2 逆時針轉(zhuǎn)動泵的排液閥180度，打開排液閥；
4.5.3 按泵的[purge]鍵，pump指示燈亮，泵大約以2ml/min的流速沖洗，3min（可設(shè)定）后自動停止；
4.5.4 將排液閥順時針旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥。
4.5.5 如管路中仍有氣泡，則重復以上操作直至氣泡排盡。
4.5.6 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設(shè)流速為5ml/min，按[pump]鍵，沖洗3min后再按[pump]鍵停泵，重新接上柱并將流速重設(shè)為規(guī)定值。

4.6      平衡系統(tǒng)
4.6.1 按《大連江申色譜數(shù)據(jù)工作站操作規(guī)程》打開“在線色譜工作站”軟件，輸入實驗信息并設(shè)定各項方法參數(shù)后，按下“數(shù)據(jù)收集”頁的 [查看基線] 按鈕。
4.6.2 等度洗脫方式
4.6.2.1 按輸送泵的[pump]鍵，泵啟動，pump指示燈亮。用檢驗方法規(guī)定的沖洗系統(tǒng)，一般zui少需6倍柱體積的流動相。
4.6.2.2 檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應予以排除。
4.6.2.3 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應不超過1MPa。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按3.5操作。

4.6.2.4 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，噪聲為<0.001mV時，可認為系統(tǒng)已達到平衡狀態(tài)，可以進樣。

4.7     測定步驟

4.7.1計算校正因子

4.7.1.1用編輯∈實驗參數(shù)編輯實驗參數(shù)在編輯實驗參數(shù)時，紀錄圖譜名要按照校正文件名的格式輸入xxxx0101.

4.7.1.2用編輯∈積分定量參數(shù)對話框，選擇單點外標法

4.7.1.3用編輯∈報告參數(shù)對話框編輯好相應的參數(shù)，選擇校正實驗檢查框

4.7.1.4用編輯∈校正∈校正實驗參數(shù)對話框編輯相應的校正參數(shù)及方式，校正文件名前綴必須與編輯∈實驗參數(shù)的文件名前4位一致

4.7.1.5用編輯∈校正編輯定量峰表對話框編輯需要的校正的色譜峰的保留時間、樣品名、每點的含量、峰標志及誤差，編輯完成后確認，以后∈校正∈計算校正因子命令利用定量峰表進行峰的匹配及計算。

4.7.1.6用∈操作∈數(shù)據(jù)采集功能進行求校正因子的實驗，將標準樣品進樣，進樣前按檢測器[zero]鍵調(diào)零，按軟件中 [零點校正] 按鈕校正基線零點，再按一下 [查看基線] 按鈕使其彈起。 

4.7.1.7用∈操作∈峰檢測功能對圖譜進行峰檢測，完成后用∈操作∈校正∈計算校正因子及繪制標準曲線。

4.7.2進樣
4.7.2.1 進樣前按檢測器[zero]鍵調(diào)零，按軟件中 [零點校正] 按鈕校正基線零點，再按一下 [查看基線] 按鈕使其彈起。用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量

4.7.2.2進行樣品分析，用∈操作∈數(shù)據(jù)采集對進行數(shù)據(jù)采集，并把編輯∈報告參數(shù)把校正文件名填入校正文件名編輯框，然后進測定樣。

4.7.2.3用∈操作∈峰檢測，對采集的色譜峰進行檢測，之后工作站自動裝入外標因子文件，計算出含量。

4.7.2.4打印報告

用∈打印∈打印分析報告，打印機輸出分析報告。

4.8關(guān)機

樣品測定結(jié)束后，將檢測器關(guān)機，將輸送管道的吸濾器放入裝有85％甲醇溶液（已脫氣）的儲液瓶，進行測定系統(tǒng)清洗，半小時后關(guān)機。

5.      注意事項

5.1流動相內(nèi)有氣泡, 關(guān)閉泵, 打開泄壓閥, 打開purge鍵, 清洗脫氣, 氣泡不斷從過濾器冒出, 進入流動相, 無論打開purge 鍵幾次,都無法清除不斷產(chǎn)生的氣泡。
    原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi), 過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖,形成菌團,阻塞了過濾器,緩沖液難以流暢地通過過濾器,空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進入流動相。
    處理過濾器浸泡于5 %硝酸溶液中,超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5 %硝酸溶液中12～36 小時, 輕輕震蕩幾次, 再將過濾器用純水清洗幾次, 打開泄壓閥, 打開p urge 鍵,清洗脫氣, 如仍有氣泡不斷從過濾器冒出, 繼續(xù)將過濾器浸泡于5 %硝酸溶液中,如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出,說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團已被硝酸破壞, 流動相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥,打開泵,流速調(diào)至1. 0～3. 0ml/ min ,純水沖洗過濾器1 小時左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥,純甲醇沖洗半小時即可。

 5.2 柱壓高原因（1） 緩沖液鹽分如（乙酸銨等） 沉積于柱內(nèi); （2） 樣品污染沉積。
    處理對于*種情況先用40～50 ℃的純水,低速正向沖洗柱子, 待柱壓逐漸下降后, 相應提高流速沖洗, 柱壓大幅度下降后, 用常溫純水沖洗, 之后用純甲醇沖洗柱子30 分鐘; 對于第二種情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子, 然后換成甲醇沖洗, 接著用甲醇+ 異丙醇（4 + 6） 沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定） , 再用換成甲醇沖洗, 然后用純水沖洗, zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30 分鐘以上。

5.3既無壓力指示,又無液體流過
    原因（1） 泵密封墊圈磨損; （2） 大量氣泡進入泵體。
    處理對于*種情況,更換密封墊圈;對于第二種情況,在泵作用的同時, 用一個50ml 的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

  5.4 壓力波動大,流量不穩(wěn)定.  
    原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物,使得兩者不能密封。
    處理工作中注意觀察流動相的量, 保證不銹鋼濾器沉入儲液器瓶底,避免吸入空氣,流動相要充分脫氣[2 >。如為單向閥和閥座之間夾有異物, 拆下單向閥, 放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗.

   5.5 出峰不佳,峰分叉。
    原因（1） 色譜柱被污染; （2） 柱頭填料塌陷。
    處理對于*種情況, 先用純水反向沖洗柱子, 然后換成甲醇沖洗, 接著用甲醇+ 異丙醇（4 + 6） 沖洗柱子（沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定） , 再換成甲醇沖洗, 然后用純水沖洗,zui后甲醇沖洗正向沖洗柱子30 分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳,則考慮第二種情況。對于第二種情況,擰開柱頭,檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分（污染的填料） ,裝入新填料, 滴一滴甲醇, 填料下陷, 再填, 用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊, 再填平, 滴甲醇, 再壓緊反復幾次, 直至裝滿填平[2 >。柱頭用甲醇沖洗干凈, 擦凈柱外壁的填料, 擰緊柱頭,用純甲醇沖洗30 分鐘以上。

  5.6峰面積重復性不佳。
    原因（1） 進樣閥漏液; （2） 加樣針不到位。
    處理對于*種情況更換進樣閥墊圈; 對于第二種情況保證加樣針插到底,注射樣品溶液后須快速、平穩(wěn)地從LOAD 狀態(tài)轉(zhuǎn)換到INJ EC T 狀態(tài),以保證進樣量的準確。日常工作中, 的保養(yǎng)非常重要, 如要注意不要讓空氣進入輸液系統(tǒng)和高壓泵中, 儲液器內(nèi)的溶液如長時間未用應清洗儲液器并更換溶液, 每次用完色譜儀后緩沖液要用純水沖洗干凈,防止無機鹽析出或沉積; 樣品的前處理也很重要,任何樣品都要盡可能地去除雜質(zhì), *溶解, 盡量減少對色譜柱的污染, 以延長色譜柱的使用壽命, 同時避免注射過濃的樣品溶液, 以免殘留液在進樣閥內(nèi)析出固體引起堵塞; 色譜柱作好標記,用于不同分析目的的色譜柱不要混用等。