細胞培養(yǎng)實驗中用量zui多的就是細胞培養(yǎng)基,雖然細胞培養(yǎng)試驗基本技術大同小異,但是每種細胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠。若偏離某種細胞所需的培養(yǎng)條件,則會導致細胞表達不同的表型
因此,在實驗前,需要熟悉自己所使用的細胞系,并在實驗中嚴格遵守所有產(chǎn)品的操作說明。
在實驗過程中,作為實驗小白,我們應該如何應對相關問題呢?
shou先,我們要如何挑選適合自己細胞生長的培養(yǎng)基呢?
選擇培養(yǎng)基沒有確切的標準,有幾點建議可供參考:
建立某種細胞株所用的培養(yǎng)基應該是培養(yǎng)這種細胞shou選的培養(yǎng)基??梢圆殚咥TCC或在購買細胞株時咨詢供應商。
根據(jù)細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養(yǎng)基。如小鼠細胞株多選RPMI1640。
其他實驗室慣用的培養(yǎng)基不妨一試,許多培養(yǎng)基可以適合多種細胞。
也可用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞,觀察其生長狀態(tài),可以用生長曲線、集落形成率等指標判斷,根據(jù)實驗室結果選擇*培養(yǎng)基,這是zui客觀的方法,但比較繁瑣。
如何正確地保存培養(yǎng)基?
普通的培養(yǎng)基放置在2-8℃冰箱避光保存,若已開封建議3周內(nèi)使用。未開封的培養(yǎng)基,一般可穩(wěn)定保存1年。
培養(yǎng)基中酚紅的作用是什么?導致培養(yǎng)基顏色變化的原因有哪些?
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。
培養(yǎng)基顏色變黃,原因有:培養(yǎng)基中細胞代謝產(chǎn)物為酸性,培養(yǎng)瓶受污染,細菌代謝產(chǎn)酸等導致。
培養(yǎng)基顏色偏暗紅色,原因有:培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中,培養(yǎng)基內(nèi)的二氧化碳逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性,而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑酚紅會隨著堿性增加而更偏暗紅。
我感覺自己的培養(yǎng)基污染了,這要怎么進行測試呢?
取0.1ml液體培養(yǎng)基涂布到無菌蛋白棟牛肉膏培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h,觀察有無雜菌生長(肉眼即可觀察到)。
如果我的培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可*保存嗎?
一旦培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素,建議避光保存在4℃冰箱且在2周內(nèi)用完。因為一些抗生素和血清的基本成分在解凍后就開始降解了。
哇!我的培養(yǎng)基怎么有沉淀了,這是怎么回事?怎么預防處理沉淀?
首先判斷培養(yǎng)基是否已經(jīng)污染,其次,若沉淀為絮狀沉淀則可能是加入血清引起的,此沉淀對細胞培養(yǎng)無影響。若沉淀為結晶,有可能是因為向培養(yǎng)基里加入的輔助試劑降低了培養(yǎng)基的溶解度,使一些無機鹽析出。
可應用離心、過濾的方法去除這些沉淀,盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
那我什么情況下可以使用不加酚紅的培養(yǎng)基呢?
研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素(特別是雌激素)的作用。為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基;一些研究人員在做流式細胞檢測時,為了避免酚紅干擾檢測,也使用不加酚紅的培養(yǎng)基。
為什么培養(yǎng)基中會含有L-*和丙酮酸鈉,它們的作用是什么?
L-*脫掉氨基后可作為培養(yǎng)細胞的能量來源參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源。盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
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