建立目的：規(guī)范BECKMAN 125型液相色譜儀的使用操作，保證液相測量結(jié)果的準確性。

1. 適用范圍
本標準適用于BECKMAN 125型液相色譜儀的使用操作。
2. 目的與意義
規(guī)范BECKMAN 125型液相色譜儀的使用操作，保證液相測量結(jié)果的準確性。
3. 責任
質(zhì)量分析人員全面負責本SOP的實施。
4. 的組成
本系統(tǒng)由SYSTEM GOLD® 125溶劑輸送泵、SYSTEM GOLD® 166檢測器（190～360 nm）、Rheodyne 7725i手動進樣閥、HT-330 柱溫箱、BECKMAN色譜工作站、打印機等組成。
5. 操作步驟
5.1. 準備
5.1.1準備所需的流動相，用合適的0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣20min。
5.1.2根據(jù)待檢樣品的需要更換合適的色譜柱（注意方向）。
5.1.3配制樣品和標準溶液，用合適的0.20μm濾膜過濾。
5.2. 開機
接通電源，依次開啟泵、檢測器開關，打開計算機進入win2000操作系統(tǒng)，雙擊桌面的32 Karat圖標進入主菜單對話框，雙擊Instrument圖標進入色譜分析界面（包括Direct Control、Det166、Instrument Setup等界面）。
5.3. 創(chuàng)建分析方法
可在Direct Control界面直接點擊各設備單元的圖像進行流動相比例、流速、zui大壓力限、zui小壓力限、檢測波長以及檢測器開啟與關閉等參數(shù)的設定，亦可點擊 “Methed/Instrument Setup” 進行相應的設定，然后點擊 “File/Methed/Save As”保存設定的方法。
5.4. 更換流動相并排氣泡
將管路的吸濾器放入裝有流動相的儲液瓶中，逆時針轉(zhuǎn)動排液閥90-180°，打開排液閥；設流速為5ml/min，沖洗3min后設流速為0停泵，將排液閥順時針旋轉(zhuǎn)到底，關閉排液閥。如管路中沒有氣泡，則排氣泡操作可省略；如管路中仍有氣泡，則重復以上操作直至氣泡排盡。
5.5. 平衡系統(tǒng)
用流動相沖洗至基線漂移<0.001AU/min，噪聲為<0.0005 AU時，可認為系統(tǒng)已達到平衡狀態(tài)，可以進樣。
5.6. 輸入樣品信息
點擊“Control/Single Run”，在Sanple ID（樣品名稱）、Method（方法）、Data path（保存路徑）、Data file（文件名）輸入相應的信心，然后點擊Submit提交。
5.7. 進樣
在“Direct Control”界面點擊AutoZero鍵調(diào)零；用進樣針定量吸取樣品溶液，在進樣閥處于INJECT狀態(tài)下插入進樣針；逆時針轉(zhuǎn)動進樣閥手柄，在LOAD狀態(tài)下推針進樣，再順時針轉(zhuǎn)動進樣閥手柄使其回至INJECT狀態(tài)即完成進樣操作。

5.8. 報告輸出與打印
在主菜單對話框內(nèi)右擊Instrument圖標，點擊“open offline”進入離線分析界面。
5.8.1系統(tǒng)默認報告格式：點擊“File/Data/New”打開相應文件后，點擊“Report/View/Area%”。
5.8.2自定義報告格式：點擊“File/Data/New”打開相應文件后，在該界面中單擊鼠標右鍵，點擊“Graphical programming/Define Peaks”，在色譜圖中單擊自定義峰的起始和終點位置，點擊“File/Method/Save”進行方法保存；點擊“Report/Analyze”，進行自定義報告的分析；點擊“Method/Custom Report”，在彈出的界面中分別點擊“Insert field”、“Insert Graph/Data Graph”和“Insert Report/Run Report”即可分別插入常規(guī)信息、圖譜、數(shù)據(jù)，從而完成自定義報告。
完成報告輸出后，點擊“Report/Print/Area%”或者“Report/Print/ Custom Report”即可打印報告。
5.9 關機
5.9.1 測定完畢后，在Direct Control界面點擊檢測器圖標關閉紫外燈。
5.9.2色譜柱的沖洗
5.9.2.1反相柱（C8、C18）：流動相含鹽的（可將加酸、加三乙胺等情況并入），以乙腈－水（5：95）（乙腈可用甲醇代替，下同）沖洗30min（可視具體情況增加沖洗時間，下同），然后以乙腈沖洗20 min以上；流動相不含鹽的，以流動相沖洗10 min以上，然后以甲醇沖洗20 min以上；流動相添加離子的，以乙腈－水（5：95）沖洗45 min以上，然后以乙腈沖洗20 min以上。流速一般設為1ml/min。成都雅源科技專業(yè)提供國產(chǎn)實驗設備，進口實驗設備（島津、安捷倫等）主要產(chǎn)品：、液相色譜儀、、氣相色譜柱、液相色譜柱、樣品瓶、標準品、凈化工作臺、旋光儀、熔點儀、色譜純試劑、、酒色譜、柱溫箱、水分測定儀、分析天平、紫外可見分光光度計、離心機、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲波清洗機、定氮儀、、折光儀、酸度計、電導率儀、農(nóng)殘速測儀、生物安全柜、恒溫濕箱、真空干燥箱、藥物穩(wěn)定性試驗箱、培養(yǎng)箱、、馬弗爐、原子吸收等。
5.9.2.2正相柱：流動相含鹽的，以不含鹽流動相沖洗30 min以上，再以正己烷沖洗20 min以上（如流動相極性與正己烷有較大差異，可在流動相沖洗后，以異丙醇低速沖洗進行過渡，注意以異丙醇為流動相流速不得超過0.5ml/min，下同）；流動相不含鹽的，以流動相沖洗20 min以上，再以正己烷沖洗20 min以上。
5.9.3 停泵，逐級關閉工作站窗口，關閉計算機及儀器各部件電源開關。
5.10 填寫儀器使用記錄
6.注意事項
6.1 流動相及樣品溶液必須用0.45um濾膜過濾，流動相還要進行脫氣處理。
6.2進樣量zui少為定量環(huán)體積的3至5倍，即20μl的定量環(huán)zui少進樣60至100μl的樣品，這樣才能*置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用100ul的平頭進樣針配合20ul滿環(huán)進樣。
6.3 待泵的壓力穩(wěn)定后，方可開啟檢測器。
6.4 試驗結(jié)束后，待泵的壓力逐步降為0后，方可關閉泵的電源。
6.5 仔細閱讀色譜柱說明書，保證色譜柱系統(tǒng)的適應性（流動相pH 2-8；柱壓小于2.5 KPSI）。

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來源成都雅源科技